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鹅巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的研制
发布者:福运快3 点击: 发布时间:2020-06-24 18:40

  鹅巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的研制_专业资料。鹅巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的研制 摘要:为了有效控制霍尔多巴吉鹅巴氏杆菌病(pasteur ellosis)的发生,将内蒙古通辽地区分离鉴定的巴氏杆菌 作为菌种,采用液体增菌培养后灭活,加入佐剂制成油乳

  鹅巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的研制 摘要:为了有效控制霍尔多巴吉鹅巴氏杆菌病(pasteur ellosis)的发生,将内蒙古通辽地区分离鉴定的巴氏杆菌 作为菌种,采用液体增菌培养后灭活,加入佐剂制成油乳剂灭活疫 苗,经无菌和安全检验合格后免疫20日龄雏鹅(0.5 ml/ 只)。结果表明,该疫苗免疫效果良好,1次免疫后保护率达7 3.3%,2次免疫后保护率达96.7%。 关键词:巴氏杆菌(pasteurella multoci da);霍尔多巴吉鹅;疫苗 study on oil-adjust inactivat ed vaccine against goose paste urella multocida abstract: to control pasteure llosis infection in holzer bug gy goose, the oil-adjust inacti vated vaccine of pasteurella m ultocida isolated from tonglia o was inoculated to 20-day-old holzer buggy goose at a dose of 0.5 ml after sterility test and safety inspection. the results showed that the vaccine was eff icient, with a protection rate o f 73.3% after initial immunizat ion and 96.7% after secondary i mmunization. key words: pasteurella multoc ida; holzer buggy goose; vaccin e 鹅巴氏杆菌病(pasteurellosis)是由禽多杀性 巴氏杆菌(pasteurella multocida)引起 的一种鹅的急性、败血性、高度接触性传染病。常引起鹅的急性败 血症及组织器官出血性炎症,其特征是高热、下痢、呼吸困难[1]。 巴氏杆菌血清型较多,采用药物防控效果比较好,但停药一段时间 又复发,造成经常用药,易产生抗药性,增加饲养成本,故疫苗的 免疫接种是预防该病的一种较好的办法。本研究旨在探讨霍尔多巴 吉鹅内蒙古通辽地区巴氏杆菌分离株油乳剂灭活疫苗的制备和对 鹅的免疫保护效果,为该病的预防提供一种方法。 1 材料与方法 1.1 病料 2011年8月中旬,内蒙古通辽某养殖场送检的霍尔多巴吉商 品鹅病、死鹅。 1.2 菌株分离鉴定 1.2.1 分离培养 将肝、肺、脾等病料无菌接种于鲜血琼 脂平板、麦康凯琼脂平板,37 ℃培养18~24 h,挑取单个 菌落,进行纯培养并鉴定。 1.2.2 菌株鉴定 挑取上述纯培养菌落抹片,瑞氏、美蓝 和革兰氏染色,镜检。 1.2.3 细菌生化试验 将纯化好的疑似巴氏杆菌菌株分别 接种于尿素、精氨酸、明胶、葡萄糖、蔗糖、半乳糖、果糖、甘露 醇、鼠李糖、乳糖、肌醇、菊糖、mr、v-p、h2s、石蕊牛 乳等生化培养基,37 ℃培养24~48 h,观察结果,同时与 标准菌株进行比较。 1.3 动物试验 用灭菌生理盐水与病死鹅肝、脾组织研磨,制成10%悬液,接 种于10只小白鼠皮下,每只0.2 ml,观察小鼠死亡时间, 取鼠肝、脾等脏器涂片染色,镜检。 1.4 巴氏杆菌悬液的制备与灭活 选定菌株接种于血液琼脂培养基上,37 ℃培养18 h,挑取 培养物接种于马丁肉汤(含0.1%血红素,1.0%血清)培养 基中,37 ℃振荡培养18 h,纯度检查后作为种子液。然后将 合格的种子液按照10%的比例再接种于制苗用的马丁肉汤中,3 7 ℃振荡培养24 h,收集菌液。在培养过程中每4 h振摇1 次,菌液培养经纯度检查合格后计数,保证含菌量达到2.5×1 010 cfu/ml。再向菌液中均匀加入0.3%的甲醛,3 7 ℃灭活48 h。菌液灭活后再取样接种于血液琼脂培养基上, 观察是否有细菌生长。 1.5 巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的制备 将灭活菌液加入2%吐温-80为水相,油相为92%白油、 6%司班-80和2%硬脂酸铝,混合均匀。然后将油相与水相按 体积比3∶1的比例混合,经高速组织匀浆机充分乳化后备用。 1.6 巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗的质量检验 1.6.1 无菌检验 取油佐剂灭活疫苗接种于血液琼脂培养 基,观察细菌生长情况。 1.6.2 黏度检验 采用流出法观察油佐剂灭活疫苗从取液 器吸管自然流出的时间。 1.6.3 稳定性检验 采用离心加速分层法,3 000 r /min离心15 min,观察液体分层情况。 1.6.4 安全检验 选择8只2周龄健康的霍尔多巴吉雏鹅, 颈部皮下注射制备好的疫苗1.0 ml/只,连续15 d观察试 验鹅注射部位、采食及精神状况。 1.7 巴氏杆菌油佐剂灭活疫苗免疫效果观察 将20日龄健康霍尔多巴吉雏鹅90只随机分成3组舍饲,第1 组:20日龄皮下接种疫苗,剂量为0.5 ml/只,分别在2 7、30、35日龄时各取10只攻毒,观察发病情况。第2组: 20日龄时第一次皮下接种疫苗,剂量为0.5 ml/只,30 日龄时按相同方法和剂量第二次免疫,然后分别在37、40、4 5日龄时各取10只攻毒。第3组:为对照组,分别于20、30 日龄时每只皮下注射无菌生理盐水0.5 ml,然后在37、4 0、45日龄时分别取10只攻毒。攻毒方法均为颈部皮下注射鹅 巴氏杆菌菌液0.4 ml/只。 2 结果 2.1 临诊及剖检结果 鹅群突然发病,3 d内死亡率达35%。送检病鹅肉髯肿大发 绀,粪便呈黄绿色或水样混有血液的稀便,从口、鼻中流出黏液, 呼吸困难。有的发生关节肿胀,表现跛行或行走不便,后期发生瘫 痪。剖检咽喉部有大量分泌物,肝脏肿大、质脆,表面有针尖大小 的出血点和灰白色坏死灶,十二指肠黏膜发生严重

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